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技术资料/正文
分子克隆之样本前处理
258 人阅读发布时间：2021-08-23 14:00
/// 研究方向：基因工程及遗传学、转基因、基因克隆、基因编辑、蛋白表达及功能分析、癌症研究、医学生物学及疫苗研究、植物育种等
分子克隆，即制备质粒或载体，将目的基因通过PCR 进行扩增后，用体外重组方法将其插入克隆载体，形成重组质粒，再通过转化或转导引入适合的微生物体内进行复制，筛选出重组成功的菌株，对其进行分离提纯得到所需的克隆载体。
分子克隆流程
样品制备（DNA/RNA提取） － 扩增目的基因（PCR/反转录） － 酶切 － 连接 － 重组质粒转化大肠杆菌 － 增菌培养 － 鉴定分析 － 分子克隆
挑战 1
核酸提取是分子克隆的最上游操作，样本前处理对分子克隆的成败至关重要。动植物组织需要低温破碎，尽量保证DNA 完整。
IKA 专家推荐
Tube Mill 控制型试管研磨机
可伴随干冰研磨，规避 DNA 在高速研磨时受热分解。
ULTRA-TURRAX® 控制型试管分散机
当样品富含纤维时，可使用正反转功能帮助缠绕的纤维解开。一机多用，可搭配分散管、球磨管或搅拌管，常用于动植物的组织分散或细胞破碎。
A 10 基本型研磨机
可用于研磨硬质的、易碎的、柔软的以及纤维类的样品，研磨量最大 50 ml。
IKA PETTE 移液器
单通道移液器，多种量程可选，采用人体工程学设计，可整支灭菌，满足实验室诸多实验应用需求。
G-L 离心机
转速范围宽泛、低噪运行且安全系数高，也是前处理的必备佳品。
Vortex 2 振荡器
经济实用型涡旋振荡器，可搭配 Eppendorf 管夹具，同时高速涡旋振荡 54 个样品，解放双手，安全无忧。
挑战 2
整个分子克隆过程涉及到诸多要求精准控温、控时的实验，如酶切、连接、反转录、RNAse 消化、DNAse 消化、转化、增菌培养等。
IKA 专家推荐
Matrix 恒温混匀器
混匀、加热、冷却三种功能可按需配置，精确控温可保证每个样品孔的温度均一性，多模块适配不同规格的反应管，是酶类温育实验的上乘直选。
Dry Block Heater 干浴器 / 金属浴
可加热不同规格反应管的样品，使用安全便捷，可规避浴液对样品的污染；搭配温度传感器可实现对样品的精确控温。
ICC 基本型 eco 18 恒温循环器套装
IKA 水浴解决方案，强劲压力抽吸泵，搭配外接温度传感器，保证控温精确，浴槽无死角，方便清洁，搭配不同夹具可对各种规格反应容器进行控温。
KS 3000, KS 4000 摇床系列
可稳定固定多个 50 ml 离心管或具塞试管，以及其它容器。控制型具备精确控温以及低转速温和振荡的能力，可保持适宜的温度，同时引入振荡，保证微生物与培养基的充分接触，提高微生物活率。
关于 IKA
IKA 集团是实验室前处理、分析技术、 工业混合分散技术的市场领导者。电化学合成仪、磁力搅拌器、顶置式搅拌器、分散均质机、混匀器、恒温摇床、移液器、研磨机、旋转蒸发仪、加热板、恒温循环器、粘度计、量热仪、实验室反应釜等相关产品构成了IKA 实验室前处理与分析技术的产品线；而工业技术主要包括用于规模生产的混合设备、分散乳化设备、捏合设备、以及从中试到扩大生产的整套解决方案。IKA 还与全球知名大学和科学家进行着密切的合作, 支持其在科研道路上不断探索。我们致力于为客户提供更好的技术, 帮助客户获得成功。
IKA 成立于1910年，集团总部位于德国南部的Staufen，在美国、中国、印度、马来西亚、日本、巴西、韩国、英国、波兰等国家都设有分公司。
分子克隆，即制备质粒或载体，将目的基因通过PCR 进行扩增后，用体外重组方法将其插入克隆载体，形成重组质粒，再通过转化或转导引入适合的微生物体内进行复制，筛选出重组成功的菌株，对其进行分离提纯得到所需的克隆载体。
分子克隆流程
样品制备（DNA/RNA提取） － 扩增目的基因（PCR/反转录） － 酶切 － 连接 － 重组质粒转化大肠杆菌 － 增菌培养 － 鉴定分析 － 分子克隆
挑战 1
核酸提取是分子克隆的最上游操作，样本前处理对分子克隆的成败至关重要。动植物组织需要低温破碎，尽量保证DNA 完整。
IKA 专家推荐
Tube Mill 控制型试管研磨机
可伴随干冰研磨，规避 DNA 在高速研磨时受热分解。
ULTRA-TURRAX® 控制型试管分散机
当样品富含纤维时，可使用正反转功能帮助缠绕的纤维解开。一机多用，可搭配分散管、球磨管或搅拌管，常用于动植物的组织分散或细胞破碎。
A 10 基本型研磨机
可用于研磨硬质的、易碎的、柔软的以及纤维类的样品，研磨量最大 50 ml。
IKA PETTE 移液器
单通道移液器，多种量程可选，采用人体工程学设计，可整支灭菌，满足实验室诸多实验应用需求。
G-L 离心机
转速范围宽泛、低噪运行且安全系数高，也是前处理的必备佳品。
Vortex 2 振荡器
经济实用型涡旋振荡器，可搭配 Eppendorf 管夹具，同时高速涡旋振荡 54 个样品，解放双手，安全无忧。
挑战 2
整个分子克隆过程涉及到诸多要求精准控温、控时的实验，如酶切、连接、反转录、RNAse 消化、DNAse 消化、转化、增菌培养等。
IKA 专家推荐
Matrix 恒温混匀器
混匀、加热、冷却三种功能可按需配置，精确控温可保证每个样品孔的温度均一性，多模块适配不同规格的反应管，是酶类温育实验的上乘直选。
Dry Block Heater 干浴器 / 金属浴
可加热不同规格反应管的样品，使用安全便捷，可规避浴液对样品的污染；搭配温度传感器可实现对样品的精确控温。
ICC 基本型 eco 18 恒温循环器套装
IKA 水浴解决方案，强劲压力抽吸泵，搭配外接温度传感器，保证控温精确，浴槽无死角，方便清洁，搭配不同夹具可对各种规格反应容器进行控温。
KS 3000, KS 4000 摇床系列
可稳定固定多个 50 ml 离心管或具塞试管，以及其它容器。控制型具备精确控温以及低转速温和振荡的能力，可保持适宜的温度，同时引入振荡，保证微生物与培养基的充分接触，提高微生物活率。
关于 IKA
IKA 集团是实验室前处理、分析技术、 工业混合分散技术的市场领导者。电化学合成仪、磁力搅拌器、顶置式搅拌器、分散均质机、混匀器、恒温摇床、移液器、研磨机、旋转蒸发仪、加热板、恒温循环器、粘度计、量热仪、实验室反应釜等相关产品构成了IKA 实验室前处理与分析技术的产品线；而工业技术主要包括用于规模生产的混合设备、分散乳化设备、捏合设备、以及从中试到扩大生产的整套解决方案。IKA 还与全球知名大学和科学家进行着密切的合作, 支持其在科研道路上不断探索。我们致力于为客户提供更好的技术, 帮助客户获得成功。
IKA 成立于1910年，集团总部位于德国南部的Staufen，在美国、中国、印度、马来西亚、日本、巴西、韩国、英国、波兰等国家都设有分公司。